Kerja enzim dipengaruhi oleh beberapa faktor penting, antara lain suhu, pH, konsentrasi enzim dan substrat, serta keberadaan inhibitor. Suhu yang terlalu tinggi atau rendah dapat merusak struktur enzim, sementara pH yang tidak optimal dapat mengubah muatan enzim. Konsentrasi enzim dan substrat mempengaruhi kecepatan reaksi, dan inhibitor dapat menghambat kerja enzim.