Kerja enzim dipengaruhi oleh beberapa faktor utama, yaitu suhu (enzim bekerja optimal pada suhu tertentu), pH (enzim memiliki pH optimal), konsentrasi enzim dan substrat (semakin tinggi konsentrasi, semakin cepat reaksi), serta keberadaan inhibitor dan aktivator (inhibitor memperlambat, aktivator mempercepat reaksi). Enzim juga memiliki sifat spesifik, yaitu hanya bekerja pada substrat tertentu, bekerja sebagai biokatalisator, dan tidak ikut bereaksi.