Kerja enzim dipengaruhi oleh beberapa faktor penting, di antaranya suhu, pH, konsentrasi enzim dan substrat, serta keberadaan inhibitor dan aktivator. Suhu yang terlalu tinggi dapat menyebabkan denaturasi enzim, sedangkan pH yang ekstrem dapat mengganggu struktur dan aktivitas enzim. Konsentrasi enzim dan substrat yang optimal diperlukan untuk mencapai kecepatan reaksi yang maksimal, sementara inhibitor dapat menghambat kerja enzim dan aktivator dapat meningkatkannya.