Enzim restriksi, juga dikenal sebagai endonuklease restriksi, adalah enzim yang memotong molekul DNA pada urutan basa tertentu yang disebut situs restriksi. Enzim ini sangat penting dalam biologi molekuler karena memungkinkan para ilmuwan untuk memanipulasi DNA, seperti dalam kloning gen dan analisis DNA. Setiap enzim restriksi mengenali urutan DNA yang unik, dan beberapa enzim memotong DNA secara langsung, sementara yang lain membuat potongan 'terhuyung' yang menghasilkan ujung lengket.